Header image
line decor
  
line decor
 
 
 
 

 

Escherichia coli e batteriofagi

Formulazioni colturali per Competent Cells

 

Il terreno colturale SOB é stato originalmente messo a punto da Hanahan per preparare le cellule competenti prima della trasformazione, al fine di massimizzare l’efficienza del processo di trasformazione stesso. La trasformazione richiede che le cellule del batterio siano “perforate” ( è questo che rende le cellule “competenti”) affinché sia possibile l’introduzione del DNA estraneo nella cellula. Le cellule competenti di Escherichia coli, perché possano sopravvivere al processo di “perforazione”, richiedono un mezzo colturale nutritivo ricco e ben bilanciato dal punto di vista isotonico.

Il triptone e l’estratto di lievito sono fonti di azoto, vitamine, fattori di crescita e di carboidrati, che aiutano le cellule a riprendersi dallo stress della trasformazione e conseguentemente potranno crescere bene.

Il cloruro di sodio e il cloruro di potassio contribuiscono a definire un ambiente isotonico equilibrato.

Il solfato di magnesio fornisce gli ioni magnesio necessari per una svariata gamma di reazioni enzimatiche, inclusa la replicazione del DNA.

Il terreno colturale SOC è utilizzato nello stadio finale della trasformazione e si prepara aggiungendo glucosio alla concentrazione di 20mM finale nel terreno SOB. Il glucosio aggiunto rappresenta una fonte di carbonio e di energia immediatamente disponibile per Escherichia coli, che può curare le ferite dovute al processo di “perforazione” e può replicarsi.


Hanahan, D., Studies on trasformation of Escherichia coli with plasmids, J.Mol.Biol., 166, 557, 1983.

Difco Manual 11th edition, Sparks, MD, (1998), 22-23.

Sambrook, J., E.F. Fritsch, and T. Maniatis, 1989, Molecular cloning: a laboratory manual, 2nd edition, ed., Cold Spring Harbour Laboratory, Cold Spring Harbour, N.Y.

 

 

 

 

 
 Range di materiali
SOB